產(chǎn)品及特點(diǎn):
熒光定量PCR是在PCR體系中加入熒光化合物(熒光染料或熒光探針)。利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,使每個(gè)循環(huán)變得“可見”。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛?RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒的試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
鮑球狀病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 | Abalone Spherical Virus | EY00P8631 |
運(yùn)輸及保存: 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個(gè)月。
自備試劑:樣品 RNA。
分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)*。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
染料法
探針?lè)ā?br />可進(jìn)行相對(duì),定量表達(dá)分析,定性分析,SNP檢測(cè)等
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
電泳圖 ·標(biāo)準(zhǔn)曲線
溶解曲線 ·擴(kuò)增曲線
完整的實(shí)驗(yàn)過(guò)程、試劑、儀器及分析報(bào)告
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7. 如果有N個(gè)樣品,設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用10μL陽(yáng)性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。也以選購(gòu)本公司的柱式病毒RNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20次免RNA提取的核酸釋放劑試用裝,該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR模板,省略了RNA提取步驟。
三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR 管,其中N+2個(gè)用于上步得到的 N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4 個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照(用第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加):
phospho-APS(Ser598) 英文名稱: 磷酸化APS抗體 0.1ml
Aurora A 英文名稱: 有絲分裂激酶A抗體 0.1ml
AIM2 英文名稱: 干擾素誘導(dǎo)蛋白AIM2抗體 0.1ml
Aquaporine 2 英文名稱: 水通道蛋白-2抗體 0.1ml
ABI2 英文名稱: 腫瘤抑制基因ABI2/蛋白激酶結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
ARL11 英文名稱: ADP核糖基化因子樣11抗體 0.2ml
ARMCX3 英文名稱: ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體 0.2ml
ARMCX1 英文名稱: ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體 0.2ml
ARMCX2 英文名稱: ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體 0.2ml
Apg10 英文名稱: 自噬相關(guān)蛋白10抗體 0.2ml
ACBD6 英文名稱: 酰基結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 0.2ml
Aminoacylase 1 英文名稱: 氨基?;?抗體 0.2ml
Adipose Triglyceride Lipase 英文名稱: 脂肪甘油三酯脂酶抗體 0.1ml
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 英文名稱: 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 0.1ml
Amphiregulin 英文名稱: 雙調(diào)蛋白(結(jié)腸直腸細(xì)胞源性生長(zhǎng)因子)抗體 0.1ml
phospho-AQP2(Ser264) 英文名稱: 磷酸化水通道蛋白2抗體 0.1ml
AXL 英文名稱: 粘附相關(guān)激酶抗體 0.1ml
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 英文名稱: 磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體 0.1ml
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶B抗體 0.1ml
phospho-AQP2(Ser269) 英文名稱: 磷酸化水通道蛋白2抗體 0.1ml
phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743) 英文名稱: 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 0.1ml
豬生長(zhǎng)激素(GH)免疫試劑盒 ApoB
豬生長(zhǎng)分化因子9(GDF9)免疫試劑盒 ALOX15B
豬腎素(Renin)免疫試劑盒 APOC4
豬腎上腺素(EPI)免疫試劑盒 ARH
豬神經(jīng)型一氧化氮合成酶(nNOS)免疫試劑盒 AUP1
豬神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)免疫試劑盒 ANKRD37
豬神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫試劑盒 A4GALT
豬色素上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒 AGTRAP
豬三碘甲狀腺原氨酸(T3)免疫試劑盒 AX2R
豬乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)免疫試劑盒 ACEI
豬乳酸脫氫酶(LDH)免疫試劑盒 AATF
豬熱休克蛋白70kDa蛋白1A(HSPA1A)免疫試劑盒 AACT-Alpha1
豬熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒 alpha 1 Antitrypsin
豬熱休克蛋白60,線粒體(HSPD1/Hsp-60)免疫試劑盒 ABCB6
豬熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒 ABCG1
豬去乙?;囸I激素(dGHRL)免疫試劑盒 Adiponectin receptor 2
豬(NE)免疫試劑盒 ANGEL1
豬趨化因子配體28(CCL28)免疫試劑盒 ANGEL2
豬(HYD)免疫試劑盒 ANKLE2
鮑球狀病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒豬前列腺素G/H合酶2(PTGS2)免疫試劑盒 ANKMY1
豬前列腺素F2α(PGF2α)免疫試劑盒 ANKRD13B
豬前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒 ANKRD20A1
豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)免疫試劑盒 ANKRD20A3