檢測胱抑素CElisa試劑盒標本時要注意的事情
點擊次數(shù)：743次 更新時間：2019-11-13
在檢測胱抑素CElisa試劑盒標本時，需要仔細認真，在遇到問題時冷靜對待。總結了以下幾點需要注意：
1、本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。
保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
2、凍結標本溶解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混合，不要在混勻器上強烈震蕩。
3、渾濁或有沉淀的標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。
4、反復凍融會使蛋白效價降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。
ELISA實驗標準曲線平直，一般有以下原因：標準曲線制備是否不當，洗孔不凈，吸孔不充分，讀數(shù)不準確或是吸量誤差。查找原因，即可找到相應解決方案。
檢測目的是為實驗提供準確可靠定量分析實驗依據(jù)。為保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面質量控制和全過程質量控制。
胱抑素CElisa試劑盒操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
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