耗牛免疫球蛋白GELISA檢測(cè)試劑盒洗滌方法
1. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止)。
7.每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
LX-2, 人肝星形細(xì)胞株
3T3-L1, 小鼠前脂肪細(xì)胞
C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞
細(xì)胞名稱
MCF-7（MCF7）（ATCC來源）, 人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-231（ATCC來源）, 人乳腺癌細(xì)胞
Raji，人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞
Saos-2，人成骨肉瘤細(xì)胞
Caco-2，人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞
MGC80-3（MGC-803）人胃癌細(xì)胞
EC109，人食管癌細(xì)胞
HGC-27人胃癌細(xì)胞
AGS人胃腺癌細(xì)胞
U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞
THP-1人單核白血病細(xì)胞
HuH-7人肝癌細(xì)胞
SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細(xì)胞
A549, 人肺癌細(xì)胞系
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌耐藥細(xì)胞株
A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細(xì)胞株
A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細(xì)胞
WM35, 人黑色素瘤細(xì)胞
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細(xì)胞株
U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞
WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞
C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞
UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌
Hela, 人宮頸癌細(xì)胞系
HNE2, 人鼻咽癌細(xì)胞系
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細(xì)胞系
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細(xì)胞
HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系
Caki-1, 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞
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