T-2毒素測定ELISA試劑盒檢查步驟
T-2毒素測定ELISA試劑盒檢查步驟
T-2毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細胞的功能,T-2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長停滯、繁殖和神經(jīng)性能障礙等。本試劑盒是應用ELISA技術的新一代真菌毒素檢測產(chǎn)品,操縱時間短于60min,能zui大限度地減少操縱誤差和工作強度。使用T2毒素試劑盒則能夠快速而正確的分析樣品中T2毒素殘留,T2毒素(T2)是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。本ELISA試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預包被T2毒素抗原,樣本中T2毒素和此抗原競爭T2毒素抗體,同時T2毒素抗體與酶標二抗相結合,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光值與其含有的T2毒素成負相關,與尺度曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中T2毒素的含量。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對人類健康及畜牧業(yè)構成了較大危害。
檢測步驟
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷凍。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本:加標準品/樣本50l到對應的微孔中,加入T2毒素酶標物50l/孔,再加入T2毒素抗試劑50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液300l/孔,充分洗滌5次,每次間隔30s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應15~20min。
8、測定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定每孔OD值。(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。
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